摘要
背景Eya1是肾元祖细胞规范的关键调控因子,与Six2相互作用促进鼻咽癌自我更新。这些基因的单倍不足导致肾脏发育不全。然而,以eya1为中心的网络是如何运作的还不得而知。
方法我们设计了一个2×HA-3×Flag-Eya1敲入小鼠系,并与anti-HA或-Flag共免疫沉淀,沉淀多重标记的- eya1及其相关蛋白。对Eya1的相互作用染色质重塑atp酶Brg1进行了功能缺失、转录组分析和全基因组结合分析。我们测定了其活性独联体-调控元件与Brg1/Six2共同占据在活的有机体内.
结果Eya1和Six2在肾脏发育过程中与基于brg1的SWI/SNF复合物相互作用。敲除Brg1导致后肾间充质形成失败和肾元祖细胞衰竭,这与肾元缺失有关Eya1表达式。转录谱显示,在Brg1缺陷细胞中,肾脏发生的重要调控因子,包括Lin28、Pbx1和Dchs1-Fat4信号通路显著下调,但足细胞谱系、致癌基因和细胞死亡诱导基因(其中许多是Brg1靶标)上调。全基因组结合分析表明,Brg1占据的远端增强子Eya1这驱动了肾元祖细胞特异性表达。我们证明Brg1可以富集到两个远端内含子增强子Pbx1的近端启动子区域Mycn需要Six2活性,这些Brg1/Six2结合的增强子调控针对Six2活性的肾元前体细胞特异性表达。
结论我们的研究结果揭示了Brg1及其下游通路及其与Eya1-Six2的相互作用在调节肾元祖细胞自我更新、分化和存活之间的微妙平衡方面的重要作用。
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